?黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。

3結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

人腎小球內皮細胞*培養基

人腎管狀上皮細胞*培養基

人腎皮層上皮細胞*培養基

人腎上皮細胞*培養基

人輸尿管上皮細胞*培養基

人腎實質細胞*培養基

人腎系膜細胞*培養基

人膀胱上皮細胞*培養基

人膀胱平滑肌細胞*培養基

人腎動脈內皮細胞*培養基

人腎動脈平滑肌細胞*培養基

人腎成纖維細胞*培養基

人膀胱成纖維細胞*培養基

人尿道上皮細胞*培養基

人腎足突細胞*培養基

人心房肌細胞*培養基

人心室肌細胞*培養基

人心肌成纖維細胞*培養基

人心臟微血管內皮細胞*培養基

人主動脈內皮細胞*培養基

人主動脈平滑肌細胞*培養基

人臍靜脈內皮細胞*培養基

人臍動脈內皮細胞*培養基

人臍靜脈平滑肌細胞*培養基

人臍動脈平滑肌細胞*培養基