鸚鵡熱嗜衣原體PCR檢測試劑盒說明書

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。

 細胞名稱植物桿菌 Lactobacillus plantarum

改良緩沖蛋白胨水/MBPW李氏菌的增殖250克國產(chǎn)/進口

小鼠虹膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

KF鏈球菌瓊脂/KF Streptococcus Agar鏈球菌的選擇性分離和計數(shù)100克國產(chǎn)/進口

地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis米曲霉 Aspergillus oryzae

苜蓿中華瘤菌馬杜拉放線菌 Actinomadura Sp.

堿性膽瓊脂/AB瓊脂/Alealine Bile Salt Agar分離霍亂弧菌250克國產(chǎn)/進口

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

Vero(非洲綠猴腎細胞)5×106cells/瓶×2

Chang liver (CCL13) (人張氏肝細胞)5×106cells/瓶×2

SK-MEL-1(人皮膚色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2

鸚鵡熱嗜衣原體PCR檢測試劑盒說明書敵菌靈  275.52  Anilazine*：101-05-3分子量： C9H5Cl3N4

乙鋁  162.16  Ethanol aluminum*：555-75-9分子量： C6H15AlO3

藥堿  Drug base  338.38分子量： C20H20NO4*：3621-38-3

(S)-3-四氫呋  87.12  (S) -3- amino tetrahydrofuran*：104530-79-2分子量： C4H9NO

染料木苷  Dye wood  432.37分子量： C21H20O10*：529-59-9

苦鬼臼毒素  Picropodophyllotoxin  414.41分子量：C22H22O8*：477-47-4

苦杏仁苷  Bitter almond  457.43分子量：C20H27*：29883-15-6

甲紫  Methyl violet  407.99分子量： C25H30ClN3*：8004-87-3

*溴亞砜  173.07  Three methyl bromide*：25596-24-1分子量： C3H9BrOS

呋胺  186.17  Furan amine salt*：97148-39-5分子量： C7H10O4N2

2--5-氟-6-甲吡  126.1315832  2- amino -5- -6-*：zfdsfg分子量： C6H7FN2