大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

絡(luò)塞維 CAS 84954-92-7 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

白花前胡素E CAS 72463-77-5 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

洋川芎內(nèi)酯I CAS 94596-28-8 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

菝葜皂苷元 CAS 126-19-2 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

蓮心堿 CAS 2586-96-1 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

羊藿苷 CAS 4 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

桑辛素 CAS 62596-29-6 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

芒果苷 CAS 4773-96-0 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

素 CAS 63968-64-9 *  規(guī)格： UV≥99%，20mg/vial

諾龍 CAS  *  規(guī)格： 1g

苑子苷A CAS 146501-37-3 *  規(guī)格： 20mg

秦皮甲素 CAS 531-75-9 *  規(guī)格： 20mg

豬苓 CAS  *  規(guī)格： 1g

燈盞花甲素 CAS  *  規(guī)格： 5mg

丹酚酸C CAS 115841-09-3 *  規(guī)格： 20mg

大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書小鼠皮下結(jié)締組織細胞  L Wnt-3A

鼠李糖發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口

小鼠白血病細胞始旋鏈霉菌 Streptomyces pristinae

TE-11(人食管細胞)5×106cells/瓶×2

MDA-MB-175VII(人腺導(dǎo)管細胞)5×106cells/瓶×2

人前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

改良V-P培養(yǎng)基/V-P Medium Modified蠟樣芽孢桿菌的溶血試驗250克國產(chǎn)/進口

人腺上皮細胞*培養(yǎng)基小鼠小腸平滑肌細胞*培養(yǎng)基

尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 規(guī)格： 250g 用途： 用于鑒別腸道菌尿素酶試驗

中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii爪哇香菇 Lentinus javanicus

SMMC-7721(人肝細胞)5×106cells/瓶×2

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。