禽腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

異土木香內酯 CAS 470-17-7 *  規(guī)格： 20mg

川芎對照藥材 CAS  *  規(guī)格： 1g

穿山龍 CAS  *  規(guī)格： 5g

朝藿定B CAS 110623-73-9 *  規(guī)格： 20mg

酸軟骨素鈉 CAS  *  規(guī)格： 250mg

榿木 CAS  *  規(guī)格： 20mg

甲胎蛋白(AFP) CAS  *  規(guī)格： 3支/套 免疫測定用

山綠茶 CAS  *  規(guī)格： 5g

枸櫞酸舒芬太 CAS  *  規(guī)格： 20mg

比妥 CAS  *  規(guī)格： 100mg

白土苓（華南肖菝葜） CAS  *  規(guī)格： 10g

卷柏(卷柏) CAS  *  規(guī)格： 2g

 CAS  *  規(guī)格： 1ml

黑豆 CAS  *  規(guī)格： 5g

銀杏內酯C(暫行) CAS  *  規(guī)格： 20mg

禽腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書亞硫酸氫鉀  120.17  Sodium bisulfite*：2145137分子量： KHSO3

雙(三膦)硼氫亞銅  602.97  雙（三膦）硼氫亞銅*：16903-61-0分子量： C36H34BCuP2

丙砜  182.24  Vinyl benzene*：16212-05-8分子量： C9H10O2S

亮藍  Blue  792.85分子量： C37H34N2Na2O9S3*：3844-45-9

隱色結晶紫  Color crystal violet  373.53分子量： C25H31N3*：603-48-5

活性嫩黃KE-3G  Active yellow ke-3g  分子量： C52H34Cl2N18O20S6.6Na*：59112-78-6

三十  Thirty acid  452.8分子量： C30H60O2*：506-50-3

異丙甲砜  122.19  Methyl group*：4853-74-1分子量： C4H10O2S

1-丁-2,3-二甲三氟磺酸咪唑  302.31  1- two methyl methyl three*：765910-73-4分子量： C10H17F3N2O3S

2-芐吡  169.22  2- benzyl pyridine*：101-82-6分子量： C12H11N

4-溴戊  227.14  4- bromo amylbenzene*：51554-95-1分子量： C11H15Br

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。