似血矛線蟲PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

三葉草瘤菌 Rhizobium trifolii酒假絲酵母 Candida kefyr

SW579(人甲狀腺鱗細胞 )5×106cells/瓶×2

印度墨汁/印度墨水/Indian ink炭疽桿菌檢測用配套試劑100毫升國產(chǎn)/進口

木耳 Auricularia auricula人間充質(zhì)干細胞-肝

Protein A Affinity MagBeads/Protein A 磁性親和純介質(zhì)1ml國產(chǎn)gersion

整合素β3(ITGβ3)重組蛋白英文名稱：Recombinant Integrin Beta 3 (ITGb3)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae小多孢菌 Micropolyspora sp.

大鼠輸尿管上細胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠結(jié)腸細胞英文名稱：CT-26 WT

人大細胞肺細胞英文名稱：NCI-H460

T24, 人膀胱細胞人前列腺成纖維細胞*培養(yǎng)基

似血矛線蟲PCR檢測試劑盒說明書SF126(人腦瘤細胞)苜蓿中華瘤菌

豬膽粉/豬膽汁粉/豬膽抽提/Bile powder of pigBR100克國產(chǎn)/進口

煌綠增菌/亮綠增菌/亮綠肉湯/Brilltant Green Enrichment Broth蛋與蛋制品中沙門氏菌檢驗250克國產(chǎn)/進口

宋氏志賀氏菌 Shigella sonnei

中國臺灣霉 Rhizopus formosensis清酒酵母 Saccharomyces sake

芽孢桿菌屬 Bacillus sp.苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)重組蛋白  Recombinant Catenin Beta 1 (CTNNb1)

α-清蛋白(αLA)重組蛋白  Recombinant Alpha-Lactalbumin (aLA)

酸性成纖維細胞生長因子(FGF1)重組蛋白  Recombinant Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1)

橄欖色鏈霉菌 Streptomyces olivaceusA9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞)

RKO-AS45-1(人結(jié)腸轉(zhuǎn)基因細胞)泡盛曲霉 Aspergillus awamori

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。