通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書

注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

小鼠多瘤病毒（POLY）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠多巴胺(DA)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠對(duì)氨基苯甲酸(PABA)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠端粒酶(TE)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠凋亡抑制基因（Bcl-2）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

小鼠抵抗素(Resistin)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書MAL蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：MAL

MSH同源蛋白1樣蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：MSX1

高度保守基因相關(guān)蛋白Membralin抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Membralin

同源盒基因Msx2抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Msx2

肌球蛋白重鏈7抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：MYH7B

膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：42071

微絲相關(guān)蛋白3樣抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：MFAP3L

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)

黑色素瘤抗原樣基因2抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：MAGEL2

EGR1結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：NAB2

磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Phospho-NFKB1 (Ser907)

核因子κB抑制蛋白β抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：IKB beta

NPIP樣蛋白1抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：NPIP-like protein 1

核因子1B抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：NFIB

NIT2蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：NIT2

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。