3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒微量法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

氧化試劑  1g

5g 8- 羥基硫酸鹽 8-Hydroxyquinoline Sulfate   室溫避光保存

50T 蠟樣芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

5g 3-(3,4- 二羥基苯 )-L-  3-(3,4-Dithydroxyphenyl)-L-Alanine  室溫干燥保存

100mL ADA Buffer，0.5M,pH7.4   ADA Buffer，0.5M,pH7.4   常溫保存

10mL DNA上樣液 (紅色),6× DNAON  4℃保存

2 ug pGBKT7-Lam pGBKT7-Lam 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

液體乳糖培養(yǎng)基 Fluid Lactose Medium 250g

1瓶 COS-7 SV40細(xì)胞株 COS-7 SV40 低溫運(yùn)輸和保存

PALCAM瓊脂平板（9cm） PALCAM Agar 10個(gè)/包

500U 熱敏 Antarctic Phosphatase -20℃保存

3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒微量法RSL1D1  細(xì)胞衰老抑制基因蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

PYGM  肌肉糖原磷酸化抗體 規(guī)格: 0.2mlSCF  干細(xì)胞生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

MAGE-1  黑色素瘤相關(guān)抗原抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300)  磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Kidins220 (Ser918)  磷酸化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

DNase I  脫氧核糖核酸1抗體 規(guī)格: 0.2mlTPD52L1/D53  瘤蛋白D53抗體 規(guī)格: 0.2ml

KLF9/BTEB1  轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Stat2 (Tyr690)  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

PDLIM3/ALP  輔肌動(dòng)蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM81A  FAM81A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

IDH3A  草酰琥珀酸脫羧α抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-mu Opioid Receptor (Ser375)  磷酸化µ-型片受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1798)  磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPPAR gamma  過(guò)氧化活化增生受體γ抗體 規(guī)格: 0.2ml

ANKMY1  睪特異性錨樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-SOX9(Ser181)  磷酸化轉(zhuǎn)錄因子SOX9蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

NFIC  核因子1C型抗體 規(guī)格: 0.2mlNuMA  核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

NT/NTS1/NTRH  神經(jīng)降壓素抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FGFR1(Tyr653/654)  磷酸化堿性成纖維細(xì)胞生因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml