磷脂酶C（PLC）測試盒微量法

商品介紹：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

實驗結果判斷我有妙招：

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩定試劑的分類及要求：

① 易揮發、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發生反應的物質要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

0.063µg 腸激（輕鏈） Enterokinase，Light Chain -20℃保存

125mL RNase-Free TE Buffer（無RNase的TE緩沖液），pH7.4   RNase-Free TE Buffer，pH7.4   常溫保存

1 管 M15大腸桿菌 M15 E.coli Strain -80℃保存

2 ug pBACPAK9 pBACPAK9 低溫運輸，-20℃保存

5次 大提柱式動物RNAout Maxi Column Animal RNAOUT 4℃保存

2 ug pcDNA3-EGFP pcDNA3-EGFP 低溫運輸，-20℃保存

馬鈴薯液體培養基（含） Potato liquid medium 250g

100mg 4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸 4-MUG 4℃避光保存

50T 牛流行熱病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

5 mg Di-2-ANEPEQ  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

磷脂酶C（PLC）測試盒微量法Rabbit Anti-rat IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的兔抗大鼠IgG 規格: 0.1ml

Kif14 protein  驅動蛋白家族Member14蛋白抗體 規格: 0.2ml

SLC14A1/RACH1  尿素轉運型糖蛋白抗體 規格: 0.2ml

ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma  雌激素受體相關蛋白3抗體 規格: 0.2ml

Deltex-1  DTX1抗體 規格: 0.2ml

SCUBE1  新型小板相關管內皮分泌蛋白SCUBE1抗體 規格: 0.2ml

G protein alpha  G蛋白α抗體 規格: 0.2ml

Nestin  巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體 規格: 0.1ml

HER2 receptor  HER2受體抗體 規格: 0.1ml

Aggrecanase-2/ADAMTS-5  軟骨蛋白聚糖抗體 規格: 0.1ml

Phospho-Paxillin(Ser83)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規格: 0.1ml

ABHD15  水解結構域蛋白15抗體 規格: 0.2ml