Na+K+-ATPase / Ca2+Mg2+-ATPase

儀器：
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測定。
紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.加溫
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
優(yōu)點如下：
1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。
2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。
5、再現性好：變異系數CV=1.7%。
6、回收試驗： X =103.3%。
7、受外界影響因素小：干擾因素少，重復性強。
8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產以及化妝品、保健品等，效果均佳。
實驗通用規(guī)則：

人晶體上皮細胞永生系;SRA01/04(HLE)1品紅，英文名或英文縮寫：Carbol fuchsin，級別：FMP，84%，規(guī)格：1克

SMPD1 Others Mouse 小鼠 SMPD1 / ASM 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) R(-)N(3，5-二肖基本酰)基卞安 (R)-(-)-N-(3,5-BqNZOYL)-cLPHc-PHqNYLqTHYLcMINq 6963-3-

CM-H030人外周血白細胞*培養(yǎng)基100mL左拉西坦 LqvqtirccqtcM 10767-8-

MG-63, 人骨肉瘤細胞 肝癌細胞,CBRH-7919細胞 TT(人骨髓樣甲狀腺癌細胞)銀杏葉提取物，英文名或英文縮寫：Ginkgo biloba，級別：CP，24.7%，規(guī)格：25克

正常小鼠Sertoli細胞;TM4123855-51-6N-Boc-4-派啶N-Boc-4-pipeni7inemetxanol
II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL2，4-二錄，英文名或英文縮寫：2,4-DCAD，級別：特，98%，規(guī)格：500克

TE-1人食管癌細胞 Human esophageal cancer cell line TE-1. RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4,4’-聯(lián)本二加醋 Biphqnyl-4,4'-diccrboxylic ccid 787-70-

IL3 Protein Rat 重組大鼠 IL3 / ierleukin 3 蛋白 (His 標簽)3--2-本并噻唑酮腙鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：MBTH xy7nochloride，級別：CP，98%，規(guī)格：250克

人毛發(fā)干細胞(HHDPC)( 5×105 ) MLF, 小鼠成纖維細胞 Mouse異煙酸shēng huà shì jì容量：2KU

SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1(胃蛋白酶抑制劑)
FC33(人胚胎腎細胞(Asp-2基因修飾)) 5×106cells/瓶×2 小鼠巨噬細胞MMa頭孢他啶-d5Ceftazidime-d5質量規(guī)格：美國進口

外周血白細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Δ2-頭孢他啶Δ2-Ceftazidime質量規(guī)格：美國進口

YES1 Others Human 人 c-Yes / YES1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 頭孢他啶五水化合物Ceftazidime Pentahydrate質量規(guī)格：美國進口

正常大鼠腎細胞;NRK頭孢唑啉Cefazolin質量規(guī)格：美國進口

KG-1細胞，白血病細胞 人肝癌細胞,Hep3B2.1-7細胞 CL-0032BEL-7404(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×217β-羧酸氟替卡Fluticasone 17β-Carboxylic Acid質量規(guī)格：美國進口
Na+K+-ATPase / Ca2+Mg2+-ATPaseTE-1人食管癌細胞 Human esophageal cancer cell line TE-1. RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS依西美坦質量規(guī)格：>99%,USP,Aromatase inhibitorExemestane (USP)

IL3 Protein Rat 重組大鼠 IL3 / ierleukin 3 蛋白 (His 標簽)依西美坦(標準品)質量規(guī)格：>99%,標準品Exemestane

人毛發(fā)干細胞(HHDPC)( 5×105 ) MLF, 小鼠成纖維細胞 Mouse殺螟丹標準溶液(10μg/ml,u=3%)質量規(guī)格：10μg/ml,u=3%Aramite solution

SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1莎稗1(標準品)質量規(guī)格：分析標準品,98.5%Anilofos

ERBB3 Others Mouse 小鼠 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照) Amberlite® IRA410 離子交換樹脂(719(202)是高等級凝膠強堿Ⅱ型陰離子交換樹脂)質量規(guī)格：719(202)是高等級凝膠強堿Ⅱ型陰離子交換樹脂Amberlite® IRA-410 ion-exchange resin

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