胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒微量法

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

氯化鈉素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g

100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride   4℃密封干燥保存

1%TTC溶液  1ml/支*5

1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存

2 ug pBlueScript SK（-） pBlueScript SK（-） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100g DNCTAB(十六烷基基)  

2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

1%聚酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g

1瓶 CCC-HEK-1細(xì)胞株 CCC-HEK-1 低溫運(yùn)輸和保存

腸球菌顯色培養(yǎng)基  1000ml

1mL EDTA溶液，0.2M EDTA Solution -20℃保存

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒微量法ADCY9  苷酸環(huán)化9抗體 0.2mlCAMK1D  鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體 規(guī)格: 0.2ml

CTGF  結(jié)締組織生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP  辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

PLAGL1/ZAC1  多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf42  17號染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2ml

UXT/Ubiquitously expressed transcript  廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體 規(guī)格: 0.2mlBEND5  BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF20  成纖維細(xì)胞生因子20抗體 規(guī)格: 0.2mlChloroplast protease  葉綠體蛋白抗體（植物） 規(guī)格: 1ml

CCDC11  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2mlLAMR1  層粘連蛋白受體1抗體（N端） 規(guī)格: 0.1ml

GPR39  G蛋白偶聯(lián)受體39抗體 規(guī)格: 0.1mlGFRA4  GDNF家族受體α-4抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-APBB1 (Ser347)  磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-IGF1R(Tyr1280)  磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

BFAR/RNF47  環(huán)指蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Ack1(Tyr284)  磷酸化Ack1抗體 0.1ml

MLF1/2/3  髓細(xì)胞性白蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體 規(guī)格: 0.1ml

TBX1/Brachyury  先心相關(guān)蛋白TBX1抗體 規(guī)格: 0.2ml